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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
產(chǎn)品名稱 ： 人外周血巨噬細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 ： 通蔚生物
組織來(lái)源 ： 外周血
產(chǎn)品規(guī)格 ： 5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介
人外周血巨噬細(xì)胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計(jì)劃中首次提出外周血這一新概念。
巨噬細(xì)胞屬免疫細(xì)胞，有多種功能，是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對(duì)象。巨噬細(xì)胞較易獲得，便于培養(yǎng)，并可進(jìn)行純化。巨噬細(xì)胞屬不繁殖細(xì)胞群，在條件適宜下可生活2-3周，多用做原代培養(yǎng)，難以長(zhǎng)期生存。巨噬細(xì)胞（M acrophages）是一種位于組織內(nèi)的白血球，源自單核細(xì)胞，而單核細(xì)胞又來(lái)源于骨髓中的前體細(xì)胞。
巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞皆為吞噬細(xì)胞，在脊椎動(dòng)物體內(nèi)參與非特異性防衛(wèi)（先天性免疫）和特異性防衛(wèi)（細(xì)胞免疫）。它們的主要功能是以固定細(xì)胞或游離細(xì)胞的形式對(duì)細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌作用（即吞噬以及消化），并激活淋巴球或其他免疫細(xì)胞，令其對(duì)病原體作出反應(yīng)。
方法簡(jiǎn)介
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血巨噬細(xì)胞采用取外周血、通過(guò)密度梯度離心法、差速貼壁、細(xì)胞因子誘導(dǎo)法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶 。
質(zhì)量檢測(cè)
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的人外周血巨噬細(xì)胞經(jīng)C D 68免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS、M -C SF、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 ： 貼壁
細(xì)胞形態(tài) ： 巨噬細(xì)胞樣
傳代特性 ： 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群
傳代比例 ： 不傳代
消 化 液 ： 利多卡因（12m M ）
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
人外周血巨噬細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用通蔚生物配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
人外周血巨噬細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈巨噬細(xì)胞樣，在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1.取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2.特殊細(xì)胞消化一
1）吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次。
2）添加利多卡因（12m M ）消化液1m L至培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，37℃溫浴3min（不能超過(guò)5min）；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基稀釋消化液。
3）用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞，吸出細(xì)胞懸液，經(jīng)1200rpm 離心5min，丟棄上清；
4）用完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)接種于相應(yīng)實(shí)驗(yàn)器具內(nèi)，待細(xì)胞完全貼壁后開始試驗(yàn)（預(yù)計(jì)2h貼壁，12-24h完全展開）。
5）待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3.特殊細(xì)胞消化二
1）若細(xì)胞無(wú)法消化，更換消化液為0.25% 胰蛋白酶，按照上述消化一方案操作。
2）若仍然無(wú)法消化，加入3ml完全培養(yǎng)基終止消化，采用無(wú)菌細(xì)胞刮，直接刮取細(xì)胞（此法不推薦，最后選擇，會(huì)造成細(xì)胞機(jī)械損傷死亡）。
4.復(fù)蘇操作說(shuō)明
1. 準(zhǔn)備好37度水浴鍋，預(yù)熱至37度。
2. 準(zhǔn)備好T25培養(yǎng)瓶，加入10ml完全培養(yǎng)基（培養(yǎng)基量必須大于凍存液10倍體積）。
3. 取出干冰內(nèi)凍存細(xì)胞管，用EP手套包裹凍存管（防止管內(nèi)進(jìn)水導(dǎo)致污染），迅速放于水浴鍋內(nèi)，于1min內(nèi)融化完全。
4. 取出凍存管，酒精噴灑消毒后擦干，置于超凈臺(tái)內(nèi)。
5. 吸取凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液，加入步驟2中準(zhǔn)備好的T25培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，8字緩慢搖勻。
6. 培養(yǎng)瓶放于37度C O 2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，靜置培養(yǎng)24h，更換新鮮換培養(yǎng)基（注意貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞不同換液操作方法）。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。
