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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ：小鼠浦肯野細胞
產(chǎn)品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：小腦組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
小鼠浦肯野細胞分離自小腦皮質(zhì)組織。小腦的表面被覆著一層灰質(zhì)，叫小腦皮質(zhì)，小腦皮質(zhì)分為3層，從表及里分別為分子層、浦肯野細胞層和顆粒細胞層。皮質(zhì)里含有星狀細胞、籃狀細胞、浦肯野細胞、高爾基細胞和顆粒細胞等5種神經(jīng)元。浦肯野細胞發(fā)出的軸突組成小腦皮質(zhì)唯一的傳出纖維，終止于小腦白質(zhì)內(nèi)的神經(jīng)核。
浦肯野細胞(Purkinje cell) 是從小腦皮質(zhì)發(fā)出的唯一能夠傳出沖動的神經(jīng)元。人的小腦皮質(zhì)約有1500萬個浦肯野細胞。浦肯野細胞還廣泛分布于心室。顯著的電生理特點是傳導(dǎo)性強，傳導(dǎo)速度快，可達4000m m /s。屬快反應(yīng)自律型細胞，具有舒張期自動除極化的性能，因而有自律性，但自律性強度明顯低于竇房結(jié)P細胞。
這類細胞常常平行排列，細胞內(nèi)電阻低，只有心室細胞的1/3。小腦：浦肯野細胞是小腦皮質(zhì)中最大的神經(jīng)元，細胞體呈梨形，頂端發(fā)出2~3條粗大的主樹突，向外伸入分子層。主樹突沿途分支繁茂，形如展開的、扁薄的扇形，鋪展在與小腦葉片長軸垂直的平面上。樹突分支上有大量的樹突棘，與傳入纖維構(gòu)成廣泛的突觸聯(lián)系，接受傳入小腦的全部信息。
軸突由細胞底部(與主樹突相對方向) 發(fā)出，細長，離開胞體不遠便形成有髓神經(jīng)纖維，向內(nèi)經(jīng)顆粒層離開皮質(zhì)進入白質(zhì)，組成小腦皮質(zhì)唯一的傳出纖維，終止于小腦內(nèi)部的神經(jīng)核團。一個浦肯野細胞的軸突約形成500個終末膨大，約與小腦深部核團的35個神經(jīng)元形成突觸。心臟浦肯野細胞常常平行排列，幾個細胞互相以漿膜連接排成一個小束，小束外包繞著基底膜。
細胞內(nèi)含肌原纖維很少，胞漿區(qū)內(nèi)充滿糖原顆粒、線粒體和肌漿網(wǎng)，細胞內(nèi)電阻低，只有心室細胞的1/3。浦肯野細胞內(nèi)無橫管系統(tǒng)，但膜電容比收縮細胞大，可能是由于其閏盤結(jié)構(gòu)廣泛而復(fù)雜，提供了較大的表面積的緣故。浦肯野細胞閏盤的主要成分是縫隙連接，粒著膜占的比例很少，這些可能是構(gòu)成浦肯野細胞傳導(dǎo)快的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的小鼠浦肯野細胞采用胰蛋白酶消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的小鼠浦肯野細胞經(jīng)N eph3免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：PLL(0. 1m g/ml)
培 養(yǎng) 基 ：含脂質(zhì)濃縮液、BSA 、M onothiogly cerol、T ran sferrin、Penicillin 、 Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態(tài) ：神經(jīng)元細胞樣
傳代特性 ：不增殖。不傳代
傳代比例 ：不傳代
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：氣相：空氣，95% 。C O2，5%
小鼠浦肯野細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
小鼠浦肯野細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈神經(jīng)元細胞樣，在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細胞不增殖。不傳代。建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 神經(jīng)元細胞消化一
1) 吸出T 25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用P B S(37℃預(yù)熱) 清洗細胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液0. 5m L至培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，37℃溫浴1min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱) 。
3. 神經(jīng)元細胞消化二
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液0. 5m L至培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，4℃冰箱靜置5min。消化后倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱) 。
4. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm ，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液0. 5m L至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min (或4℃冰箱靜置5-7min) 。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm ，離心5min，丟棄上清，用5ml完全培養(yǎng)基(補加1% FBS，促進貼壁) 重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱) 。
5. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ （2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/ml），明膠（0. 1% ），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
特殊注意事項
5. 神經(jīng)元細胞貼壁不牢，必須包被培養(yǎng)器皿。細胞遇冷易收縮脫落，所用試劑需37℃預(yù)熱，
室溫觀察時間不宜過長。
