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維容氏支原體探針?lè)≧T-LAMP試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
維容氏支原體(Mycoplasma wenyonii)是引起牛嗜血支原體病的主要病之一，多引起牛貧血、黃疸、發(fā)熱和消瘦等癥狀，對(duì)養(yǎng)牛業(yè)造成一定的危害，因此快速檢測(cè)維容氏支原體具有重要的意義。為此，本公司開(kāi)發(fā)了本檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
產(chǎn)品及特點(diǎn)
維容氏支原體(Mycoplasma wenyonii)是引起牛嗜血支原體病的主要病之一，多引起牛貧血、黃疸、發(fā)熱和消瘦等癥狀，對(duì)養(yǎng)牛業(yè)造成一定的危害，因此快速檢測(cè)維容氏支原體具有重要的意義。為此，本公司開(kāi)發(fā)了本檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供病毒RNA樣品。
2. 恒溫?cái)U(kuò)增，可以不需要貴重的熒光PCR等貴重儀器。
3. 含探針，可以進(jìn)一步提高專(zhuān)一性。
4. 檢測(cè)靈敏性可以達(dá)到100拷貝/反應(yīng)左右。
5. 特異性高，擴(kuò)增引物和檢測(cè)探針均根據(jù)維容氏支原體RNA保守序列設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他生物的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
6. 一般30分鐘內(nèi)出結(jié)果，比RT-PCR快。
7. 提供無(wú)傳染性的陽(yáng)性對(duì)照，便于分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
8. 提供內(nèi)參，便于識(shí)別假陰性。
9. 本產(chǎn)品只能用于定性分析，不推薦用于定量分析。
10. 上樣量大，對(duì)20 μL的反應(yīng)體系，樣品加樣量高達(dá)到13μL。
11. 內(nèi)含的dUTP-UNG可防交叉污染。
12. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針?lè)晒釸T-LAMP擴(kuò)增。
13. 只可用于科研。
規(guī)格及成分
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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RT-LAMP MasterMix（探針?lè)ǎ用福?/span> |
200μL |
0.5mL本色蓋 |
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逆轉(zhuǎn)錄酶-擴(kuò)增酶混合液 |
100μL |
0.5mL紅蓋管 |
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20×維容氏支原體RT-LAMP引物探針混合液干粉（含內(nèi)參引物） |
50次 |
0.5mL白色管 |
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維容氏支原體RT-LAMP陽(yáng)性對(duì)照（1E4拷貝/μL） |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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RT-LAMP通用外源內(nèi)參（1E4拷貝/mL） |
50μL |
0.5mL綠蓋管 |
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使用手冊(cè) |
1份 |
無(wú) |
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本產(chǎn)品采購(gòu)五孔盒包裝 |
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注 意：首次使用本產(chǎn)品的時(shí)候，需要在引物探針混合液干粉（含內(nèi)參引物）管中加入60 μL的自備超純水，渦旋震蕩后短暫離心的到引物探針混合液。 |
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使用方法
樣品DNA的制備
樣品DNA的制備
1. 用自選方法純化樣品RNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)RNA提取試劑盒兼容，包括本公司的免提取的核酸釋放劑。
2. 如果有N個(gè)樣品，則需要做N+2個(gè)樣品制備，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照（PC）和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照（NC）。PC用10 μL本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照（1E4拷貝/μL）加一定量的水使得其總體積跟核酸純化試劑盒所要求的起始樣品體積一樣，NC用水替代。
3. N+2個(gè)樣品的每個(gè)樣品在純化前，每個(gè)都要加入10 μL本試劑盒提供的RT-LAMP通用外源內(nèi)參（1E4拷貝/μL），相當(dāng)于每個(gè)樣品在進(jìn)行核酸純化前，含有1E5個(gè)拷貝的內(nèi)參分子。
探針?lè)晒釸T-LAMP反應(yīng)20μL體系
4. 注意：第一次使用一個(gè)新的試劑盒時(shí)，必須先將100 μL逆轉(zhuǎn)錄酶-擴(kuò)增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix（探針?lè)?，待加酶）中，輕柔吹打半分鐘混勻，蓋上蓋子后再輕柔顛倒1分鐘混勻，然后取用。
5. 反應(yīng)設(shè)置：如果有N+2個(gè)RNA純化樣品，則設(shè)置N+5個(gè)RT-LAMP擴(kuò)增，增加一個(gè)陰性對(duì)照、一個(gè)內(nèi)參擴(kuò)增對(duì)照和一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照。
6. 本產(chǎn)品含兩種探針，故在設(shè)置熒光PCR儀時(shí)，設(shè)置60次循環(huán)，每次65℃保溫1分鐘，采集FAM和Cy5兩個(gè)通道的熒光信號(hào)。FAM是樣本探針的熒光標(biāo)記，Cy5是內(nèi)參探針的熒光標(biāo)記，淬滅基團(tuán)均是TAMRA。
結(jié)果分析
7. 判斷實(shí)驗(yàn)有效性：擴(kuò)增陰性對(duì)照必須沒(méi)有FAM信號(hào)的擴(kuò)增（擴(kuò)增是指Ct在40以?xún)?nèi)，熒光信號(hào)呈現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)的S型擴(kuò)增曲線。任何一個(gè)不滿(mǎn)足此兩個(gè)條件，均判讀為無(wú)擴(kuò)增。下同），擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照必須有FAM信號(hào)的擴(kuò)增，否則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無(wú)效，需要分析原因。擴(kuò)增陰性對(duì)照如果有擴(kuò)增，表示實(shí)驗(yàn)試劑或環(huán)境有模板DNA的污染。擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照沒(méi)有FAM信號(hào)的擴(kuò)增表示試劑盒或擴(kuò)增設(shè)備或操作有問(wèn)題，需要分別排查。找到原因并解決問(wèn)題后方可重啟實(shí)驗(yàn)。
8. 如果實(shí)驗(yàn)有效，則可以分析N+2個(gè)樣品的情況。
情況1、FAM信號(hào)有擴(kuò)增，則此樣品應(yīng)判為陽(yáng)性，不論Cy5信號(hào)有無(wú)擴(kuò)增。
情況2、樣FAM信號(hào)無(wú)擴(kuò)增，但Cy5信號(hào)有擴(kuò)增，則此樣品應(yīng)判為陰性；
情況3、FAM信號(hào)和Cy5信號(hào)均無(wú)擴(kuò)增，此樣品應(yīng)判為假陰性（可能原因之一是此樣品中有抑制物，也可能核酸在純化過(guò)程中丟失）。此樣品需要稀釋不同倍數(shù)后再測(cè)或/和重新進(jìn)行核酸制備。
自備試劑
待測(cè)樣品
待測(cè)樣品
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
