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021-54845833/15800441009
簡介
Periostin（POSTN、PN或成骨細胞特異性因子OSF-2）是一種蛋白質(zhì)，由POSTN基因編碼。Periostin作為α-V/β-3和α-V/β-5整合素的配體，支持上皮細胞的粘附和遷移。骨膠原蛋白是一種釉質(zhì)結(jié)構(gòu)的維生素K依賴性因子，它是一種分泌型細胞外基質(zhì)蛋白，最初在間質(zhì)系細胞（成骨細胞、成骨細胞衍生的細胞、牙周韌帶和骨膜）中被發(fā)現(xiàn)。它與癌癥中的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化以及發(fā)育中的心臟中的間質(zhì)分化有關(guān)。該蛋白與昆蟲中的分泌型細胞粘附分子Fasciclin I有同源性。在許多癌癥中，periostin與癌細胞上的整合素結(jié)合，激活Akt/PKB和FAK介導的信號傳導途徑。這導致了細胞存活率、侵襲、血管生成、轉(zhuǎn)移和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的增加。在人類和小鼠中，periostin在其C端區(qū)域進行替代剪接，產(chǎn)生特定的異構(gòu)體，可在廣泛的癌癥中觀察到，如胰腺癌、結(jié)腸癌和乳腺癌。雖然骨膠原蛋白在組織發(fā)育和疾病中發(fā)揮著廣泛的作用，但它在組織重塑中作為對損傷的反應的功能是這些不同機制中共同的基本作用。在細胞命運的變化過程中，無論是與生理學的改變還是與病理變化有關(guān)，圍巖蛋白都會暫時性地上調(diào)。它影響細胞外基質(zhì)的重組、組織重塑和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，所有這些都可能與組織愈合、發(fā)育和疾病有關(guān)。因此，它的功能是作為一個調(diào)解人，平衡對組織損傷的適當和不適當?shù)姆磻?/span>。
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù) : 將捕獲抗體包被于酶標板上，捕獲樣品及標準品中的待測物POSTN/OSF-2，清洗后，再加入生物素標記的檢測抗體進行孵育后清洗，形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體”免疫復合物，隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶進行孵育，待孵育結(jié)束后清洗，接著加入TMB顯色后，若樣本中有待測物則顯藍色，加入終止液停止反應。檢測過程中游離的成分均被洗去，用酶標儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測物的含量呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣本中POSTN/OSF-2的濃度。
需要的其他材料
1. 酶標儀，包含450nm測定波長，同時包含600-680nm校正波長更佳；
2. 移液器及槍頭；
3. 蒸餾水或去離子水；
4. 100-1000 mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機；
6. 水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度；
7. 用于稀釋標準品和樣品的試管。
樣品保存
樣品收集后若在 1 周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個月內(nèi)檢測），或-80℃（6個月內(nèi)檢測），避免反復凍融，標本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
試劑準備工作
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）
標準品配置
試劑盒中取出標準品，準備7個試管，先從200ng/mL標準品（200μL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至10ng/mL（例：50μL的標準品母液+950μL的1×稀釋液，制備得到1000μL的10ng/mL濃度標準品），隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液，在這6個單獨的試管中將10ng/mL標準品依次2倍倍比稀釋至6個梯度，共配制7個濃度的標準品，依次為: 10ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL、0.625ng/mL、0.313ng/mL、0.156ng/mL，從最高濃度標準品溶液中吸取500μL標準品到下一個試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進行標準品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標準品(0ng/mL)。
抗體工作液配置
使用前10分鐘，將100×生物素化抗體于1000×g離心1分鐘，隨后用1×稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×生物素化抗體工作液，根據(jù)所需用量當日配置當日使用。
酶結(jié)合物工作液配置
使用前10分鐘，將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘，隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液，根據(jù)所需用量配置。
備 注：如待測樣本中POSTN/OSF-2濃度高于標準品最高值，請根據(jù)實際情況選擇適當?shù)南♂尡稊?shù)。
結(jié)果的計算
計算標準品和樣本復孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標準曲線(作圖時去掉空白組的值)?；蛘呤褂媚軌蛏伤膮?shù)邏輯（4-P）曲線擬合的計算機軟件來創(chuàng)建標準曲線。若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應的稀釋倍數(shù)。
示例數(shù)據(jù)
標準品濃度(ng/mL)
10
5
2.5
1.25
0.625
0.313
0.156
0
OD值
2.434
1.671
0.934
0.624
0.37
0.24
0.2
0.061
校正OD值
2.373
1.61
0.873
0.563
0.309
0.179
0.139
0.0
以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實驗者需根據(jù)自己的實驗數(shù)據(jù)建立標準曲線。
下圖所示標準曲線僅供示例，結(jié)果計算應以同次試驗標準品所繪標準曲線為準計算樣本結(jié)果
重復性
板內(nèi)變異系數(shù)小于10%，板間變異系數(shù)小于10%。
靈敏度
經(jīng)樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為0.08ng/mL。
特異性
該試劑盒測定可識別重組人POSTN/OSF-2。
其他相關(guān)蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL，并測定交叉反應性。沒有觀察到明顯的交叉反應。
使用ELISA試劑盒之前，請您必須完整閱讀說明書，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷和治療。
