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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ：小鼠下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：腦組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介
小鼠下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞分離自下丘腦。下丘腦又稱丘腦下部，位于大腦腹面、丘腦的下方，是調(diào)節(jié)內(nèi)臟活動(dòng)和內(nèi)分泌活動(dòng)的較高級(jí)神經(jīng)中樞所在。下丘腦自前向后可分三部，即前部(又名視前區(qū)和視上區(qū)) ﹑中部(結(jié)節(jié)區(qū)) 和后部(乳頭體區(qū)) 。下丘腦具有許多細(xì)胞核團(tuán)和纖維束，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的其它部位具有密切的相互聯(lián)系。
它不僅通過神經(jīng)和血管途徑調(diào)節(jié)腦垂體前﹑后葉激素的分泌和釋放，而且還參與調(diào)節(jié)自主神經(jīng)系統(tǒng)，如控制水鹽代謝﹑調(diào)節(jié)體溫﹑攝食﹑睡眠﹑生殖、內(nèi)臟活動(dòng)以及情緒等。下丘腦神經(jīng)元與來自其他部位的神經(jīng)纖維有廣泛的突觸聯(lián)系，可以接受很多神經(jīng)沖動(dòng)，為內(nèi)分泌系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的中心。
它們能調(diào)節(jié)垂體前葉功能，合成神經(jīng)垂體激素及控制自主神經(jīng)和植物神經(jīng)功能。故提取下丘腦神經(jīng)元進(jìn)行體外培養(yǎng)，建立下丘腦神經(jīng)元體外實(shí)驗(yàn)平臺(tái)具有重要意義。
方法簡介
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞采用胰蛋白酶消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：PLL(0. 1m g/ml)
培 養(yǎng) 基 ：含B-27 Supplem ent、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細(xì)胞形態(tài) ：神經(jīng)元細(xì)胞樣
傳代特性 ：屬于終末分化細(xì)胞。屬于不增殖細(xì)胞群
傳代比例 ：不傳代
消 化 液 ：0. 125% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：氣相：空氣，95% 。C O2，5%
小鼠下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
小鼠下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈神經(jīng)元細(xì)胞樣，在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞屬于終末分化細(xì)胞。屬于不增殖細(xì)胞群。建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)
實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 靜置后，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，拍照記錄細(xì)胞的貼壁情況，漂浮的細(xì)胞需離心收集后在離心管消化(脫落細(xì)胞處理方式) ，貼壁細(xì)胞也需消化后與脫落的細(xì)胞合并一起后重新接種。
3. 神經(jīng)元細(xì)胞消化
1) 將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心收集細(xì)胞(1200rpm5min) ，細(xì)胞沉淀按照下面脫落細(xì)胞處理方式處理該部分細(xì)胞。
2) 培養(yǎng)瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞，用PBS(37℃預(yù)熱) 清洗細(xì)胞一次，將PBS收集到步驟1的離心管中，不要直接丟棄。
3) 添加0. 125% 胰蛋白酶消化液(0. 25% 胰酶用PBS稀釋一倍) 1m L至培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，放入4℃冰箱消化細(xì)胞3-5min(或者37℃溫浴1min ) 。
4) 倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化(稀釋法終止消化，培養(yǎng)基用量不低于5ml) 。
5) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞，1200rpm 5min 離心去除殘留胰酶。
6) 去掉上清，加入適量的完全培養(yǎng)基混勻(可補(bǔ)加1% FB S，促進(jìn)貼壁) ，接種于孔板中(提前多聚賴氨酸包被孔板) 。
7) 待細(xì)胞貼壁后可用于后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
4. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液，1200rpm 5min離心，保留沉淀。
2) 添加0. 125% 胰蛋白酶消化液(0. 25% 胰酶用PBS稀釋一倍) 1m L至離心管中，輕柔重懸沉淀，放置4℃冰箱靜置3-5min ) 。
3) 消化完向離心管內(nèi)加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
4) 經(jīng)1200rpm ，離心5min，丟棄上清，用5ml完全培養(yǎng)基(可補(bǔ)加1% FBS，促進(jìn)貼壁) 重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
5) 接種后絕對(duì)靜置24-48小時(shí)， 48小時(shí)后觀察，否則細(xì)胞容易聚團(tuán)。
5. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ （2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/ml），明膠（0. 1% ），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
特殊注意事項(xiàng)
5. 神經(jīng)元細(xì)胞貼壁不牢，必須包被培養(yǎng)器皿。細(xì)胞遇冷易收縮脫落，所用試劑需37℃預(yù)熱，室溫觀察時(shí)間不宜過長。
