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生物素BT(BT)ELISA試劑盒
簡介
生物素（維生素H或維生素B7）在免疫學中具有多種重要作用和應用。首先生物素是多種酶的輔酶，參與脂肪、蛋白質(zhì)和碳水化合物的代謝過程，對維持正常生理功能至關(guān)重要。在免疫系統(tǒng)中，生物素通過抑制炎癥因子的活化來調(diào)控免疫反應，有效降低IL-2和IL-1β等促炎細胞因子的水平。
生物素在免疫檢測中也有廣泛應用，生物素標記的抗體可以用于免疫熒光、免疫組織化學、蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）等技術(shù)中，提高檢測的靈敏度和特異性。此外，生物素與鏈霉親和素的高親和力結(jié)合使其在免疫分析中非常有用，但高劑量的生物素可能干擾免疫分析結(jié)果。在動物生產(chǎn)中，生物素的添加可以顯著提高動物的免疫功能。有研究表明生物素能促進免疫細胞的增殖，提高免疫器官的質(zhì)量指數(shù)，改善脾臟的代謝狀況，從而增強機體的免疫功能。本酶聯(lián)免疫檢測試劑盒可以經(jīng)濟、快速地樣本中的BT的殘留量。
檢測原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被偶聯(lián)抗原，樣本中BT和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭BT抗體，加入酶標二抗后，形成包被抗原-抗體-酶標二抗復合物。隨后結(jié)合的酶催化TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的BT成負相關(guān)。通過標準曲線可準確定量樣品中BT的含量。通過標準曲線計算所得值乘以樣品處理的稀釋倍數(shù)即為實際樣品中BT的含量。
需要的其他材料
1. 酶標儀，450nm/630nm；
2. 移液器及槍頭；
3. 蒸餾水或去離子水；
4. 100-1000 mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機；
6. 恒溫培養(yǎng)箱；
7. 振蕩器；
8. 天平（感量0.01g）；
9. 用于稀釋標準品和樣品的試管；
10. 50mL離心管。
試劑準備
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）
標準品配置
試劑盒中取出標準品，準備7個試管，先將32ppm標準品（200μL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至1600ppb（例：50μL的標準品母液+950μL的1×稀釋液，制備得到1000μL的1600ppb濃度標準品），隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液，在這6個單獨的試管中將1600 ppb標準品依次 2 倍倍比稀釋至6個梯度，共配制7個濃度的標準品，依次為：1600ppb、800ppb、400ppb、200ppb、100ppb、50ppb、25ppb，從最高濃度標準品溶液中吸取200μL標準品到下一個試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進行標準品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標準品(0ppb)。
一抗工作液配置
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×一抗工作液稀釋成1×一抗工作液，根據(jù)所需用量配置。
酶標二抗工作液配置
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×酶標二抗稀釋成1×酶標抗體工作液，根據(jù)所需用量配置。
備 注：如樣本中待測物濃度高于標準品最高值，請根據(jù)實際情況選擇適當?shù)南♂尡稊?shù) (建議：將待測樣本用樣品稀釋液最低稀釋1倍，在正式實驗之前做預實驗，以確定具體稀釋倍數(shù)) ；標準品母液及100×酶標二抗溶液根據(jù)實驗所需酶標板孔數(shù)吸取一定量配制工作液，剩余溶液應放回-20℃儲存，且避免反復凍融。（若實驗在1-2周內(nèi)做完，標準品母液及100×酶標抗體置于2-8℃保存；若實驗為長時間跨度實驗，建議將標準品母液及100×酶標抗體置于-20℃保存，以保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性）
結(jié)果的計算
計算標準品和樣本復孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標準曲線(作圖時去掉空白組的值)?；蛘呤褂媚軌蛏伤膮?shù)邏輯（4-P）曲線擬合的計算機軟件來創(chuàng)建標準曲線。若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應的稀釋倍數(shù)。
精密度
批內(nèi)精密度 ：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在同一個板塊內(nèi)精度評估。
批內(nèi)變異系數(shù) CV%小于10%。
批間精密度 ：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。
批間變異系數(shù) CV%小于15%。
回收率
樣本回收率：80% - 120%
靈敏度
經(jīng)樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為25 ppb。
線性關(guān)系
校準品劑量反應曲線相關(guān)系數(shù) r 值，大于等于0.9970。
本ELISA試劑盒實驗計算和曲線圖，請您下載產(chǎn)品說明書(供參考），本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷和治療。
