購(gòu)物車
幫助
021-54845833/15800441009
產(chǎn)品及特點(diǎn)
生物制品中的非目標(biāo)DNA 殘留作為工藝相關(guān)雜質(zhì)，具有一定的風(fēng)險(xiǎn)性，包括致瘤性、感染性以及免疫原性等。腺相關(guān)病毒 (Adeno－Associated Virus，AAV) 由于自身高穩(wěn)定性及安全性、低免疫原性等特點(diǎn)在基因治療領(lǐng)域備得到廣泛的用于，目前市面上 基因治療用AAV大多數(shù)為重組腺相關(guān)病毒 ( Recombinat Adeno-Associated Virus，rAAV) 載體，相關(guān)指導(dǎo)原則中明確指出應(yīng)當(dāng)在質(zhì)量監(jiān)控環(huán)節(jié)加以監(jiān)控，因此檢測(cè)重組腺相關(guān)病毒殘留DNA具有重要的意義，為此本公司基于熒光定量PCR技術(shù)，開(kāi)發(fā)了專門用于檢測(cè)樣品中重組腺相關(guān)病毒殘留DNA的本產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：
生物制品中的非目標(biāo)DNA 殘留作為工藝相關(guān)雜質(zhì)，具有一定的風(fēng)險(xiǎn)性，包括致瘤性、感染性以及免疫原性等。腺相關(guān)病毒 (Adeno－Associated Virus，AAV) 由于自身高穩(wěn)定性及安全性、低免疫原性等特點(diǎn)在基因治療領(lǐng)域備得到廣泛的用于，目前市面上 基因治療用AAV大多數(shù)為重組腺相關(guān)病毒 ( Recombinat Adeno-Associated Virus，rAAV) 載體，相關(guān)指導(dǎo)原則中明確指出應(yīng)當(dāng)在質(zhì)量監(jiān)控環(huán)節(jié)加以監(jiān)控，因此檢測(cè)重組腺相關(guān)病毒殘留DNA具有重要的意義，為此本公司基于熒光定量PCR技術(shù)，開(kāi)發(fā)了專門用于檢測(cè)樣品中重組腺相關(guān)病毒殘留DNA的本產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到0.001 pg/μL。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物和探針是根據(jù)重組腺相關(guān)病毒DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測(cè)，又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級(jí)。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針?lè)晒舛縋CR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
|
成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
|
2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
|
熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠色蓋 |
|
超純水 |
1mL |
1.5mL藍(lán)色蓋 |
|
重組腺相關(guān)病毒殘留qPCR引物-探針干粉 |
50次 |
0.5mL棕色管 |
|
重組腺相關(guān)病毒殘留qPCR陽(yáng)性對(duì)照(100 pg/μL) |
50μL |
0.5mL黃色蓋 |
|
使用手冊(cè) |
1份 |
無(wú) |
|
本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
||
|
注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入162 μL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
||
使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以100 pg-0.001 pg/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6、5、4，3、2、1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL 熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1×100 pg/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10 pg/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10 pg/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1 pg/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5 μL 1pg/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得100 ng/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到從100 pg/μL 到1 ng/μL 共6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL上步所得4號(hào)稀釋液再加上一定量的水使總體積跟核酸純化試劑盒所要求的其實(shí)樣本體積相同。NC可以用水替代。本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸純化試劑盒兼容，也可以選購(gòu)本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qPCR反應(yīng)20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
8. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照（直接用第6步第4號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果樣本制備陽(yáng)性對(duì)照或PCR陽(yáng)性對(duì)照(包括標(biāo)曲樣本)結(jié)果為陰性，則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無(wú)效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要重新樣本制備，重新進(jìn)行PCR擴(kuò)增或跟廠家聯(lián)系。如果樣本制備陰性對(duì)照或PCR陰性對(duì)照結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明環(huán)境污染，則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無(wú)效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要跟廠家聯(lián)系。
2. 如果陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照均正常，則實(shí)驗(yàn)有效，可以進(jìn)入后續(xù)分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
4. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照必須無(wú)Ct或Ct大于或等于40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于40，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。如果實(shí)驗(yàn)有效，則分析待測(cè)樣品，如果無(wú)Ct或Ct大于或等于40，則為陰性。如果Ct小于40則為陽(yáng)性。
自備試劑
樣品DNA
樣品DNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期2年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期2年
