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單峰駱駝源性成分探針法PCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有單峰駱駝源性成分?，F(xiàn)代食品加 工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時部分食材還有致敏性，因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術(shù)將對食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。本公司開發(fā)了簡單快捷的單峰駱駝源性成分探針法熒光定量PCR檢測試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有單峰駱駝源性成分?，F(xiàn)代食品加 工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時部分食材還有致敏性，因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術(shù)將對食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。本公司開發(fā)了簡單快捷的單峰駱駝源性成分探針法熒光定量PCR檢測試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 提供陽性對照和內(nèi)參，便于排除假陰性結(jié)果。
3. 根據(jù)單峰駱駝保守區(qū)域設(shè)計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的單峰駱駝成分。
4. 對混合樣品中單峰駱駝成分的檢測下限為0.01%，對樣品中單峰駱駝成分的核酸檢測下限為0.1ng/μL。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5各數(shù)量級。
6. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。
7. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法PCR反應(yīng)。
8. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為2.0小時。
9. 本只能用于科研，足夠50次20uL體系的熒光定量PCR。
規(guī)格及成分
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MagicMix |
500μL |
0.5mL本色管 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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單峰駱駝qPCR引物-探針混合液（含內(nèi)參探針） |
200μL |
0.5mL棕色管 |
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單峰駱駝PCR陽性對照(1×10E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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單峰駱駝PCR內(nèi)參(1×10E4拷貝/μL) |
250μL |
0.5mL白蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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使用方法
稀釋含內(nèi)參的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以陽性對照10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度和內(nèi)參固定在10E3拷貝/μL為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。
稀釋含內(nèi)參的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以陽性對照10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度和內(nèi)參固定在10E3拷貝/μL為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。
1. 標(biāo)記6個離心管，分別為6，5，4，3，2，1，0。
2. 在0號管中加入280μL熒光PCR專用模板稀釋液，35μL本試劑盒提供的內(nèi)參，震蕩一分鐘混勻。
3. 用帶芯槍頭分別將上步得到的混合液按45μL/管加入到標(biāo)記的1-6號管中，用帶芯槍頭（下同）。
4. 在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 換槍頭，在4號管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線陽性樣品，每個樣品中內(nèi)參的濃度固定為10E3拷貝/μL。放冰上待用。
樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。在所有樣本中加入5uL 本試劑盒提供的內(nèi)參（共50000拷貝）。
9. 用自選方法純化樣品的DNA（含內(nèi)參），本試劑盒跟市場上大多數(shù)DNA提取試劑盒兼容，也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qPCR反應(yīng)20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
10. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果擴(kuò)增陽性對照或制備陽性對照結(jié)果為陰性，則整個擴(kuò)增或制備實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要重做擴(kuò)增或制備或跟廠家聯(lián)系。如果擴(kuò)增陰性對照或制備陰性對照結(jié)果為陽性，說明環(huán)境污染，則整個擴(kuò)增或制備實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要跟廠家聯(lián)系，購買新的引物和探針。對任何陰性樣品，如果內(nèi)參無Ct，則此樣品的陰性結(jié)果無效，此樣品需要重復(fù)實驗。
2. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，分別以陽性對照（FAM通道）和內(nèi)參（HEX通道）的Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，陽性對照的標(biāo)準(zhǔn)曲線為斜線，r2必須大于0.95，內(nèi)參的標(biāo)準(zhǔn)曲線為一條跟X軸平行的橫線。再以待測樣品的Ct值從陽性對照的標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
3. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照FAM通道的Ct必須大于或等于40。陽性對照FAM通道的熒光信號必須有對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于或等于35。對待測樣品，如果其Ct大于或等于40則為陰性，如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性，如果小于40，則為陽性。對任何FAM通道結(jié)果為陰性的樣品，如果其對應(yīng)的內(nèi)參HEX通道無Ct，則此樣品的陰性結(jié)果無效，此樣品需要重復(fù)實驗。
自備試劑
樣品DNA
樣品DNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
