對(duì)于實(shí)驗(yàn)室搞科研的小伙伴第一次接觸細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)緊張又興奮，害怕自己會(huì)出錯(cuò)。今天，上海通蔚生物在這里為大家科普一下細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)，希望可以幫助您在科研之路少走些彎路。

  什么是細(xì)胞培養(yǎng)

  細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture）是指從動(dòng)物或植物中取出細(xì)胞，然后在人工環(huán)境（無(wú)菌、適宜溫度、酸堿度和一定營(yíng)養(yǎng)條件等）中培養(yǎng)以進(jìn)行科學(xué)研究。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)正規(guī)的名詞叫細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是直接從組織中取出并通過(guò)酶或機(jī)械方法進(jìn)行解離，也可以來(lái)源于已建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株。

  培養(yǎng)細(xì)胞類別哪些？

  細(xì)胞培按類別可分為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、植物細(xì)胞培養(yǎng)和微生物細(xì)胞培養(yǎng)三類，下面參考表格：

  請(qǐng)注意，這只是對(duì)細(xì)胞類別培養(yǎng)及其特點(diǎn)的一個(gè)簡(jiǎn)化概述，具體的培養(yǎng)條件和應(yīng)用領(lǐng)域可能因具體的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩兴煌?

  細(xì)胞培養(yǎng)要注意事項(xiàng)

  細(xì)胞培養(yǎng)要注意在無(wú)菌環(huán)境下、合適的溫度、適宜的滲透壓和氣體環(huán)境與PH等。

  1、無(wú)菌環(huán)境。在進(jìn)行人工環(huán)境下首先要注意是無(wú)菌五毒，這樣可以保證細(xì)胞在人工環(huán)境下生長(zhǎng)繁殖。

  2、合適的溫度。環(huán)境溫度是影響細(xì)胞生長(zhǎng)的一個(gè)重要條件。細(xì)胞培養(yǎng)條件一般36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞正常代謝會(huì)收到影響，甚至死亡。

  3、合適的滲透壓。滲透壓，本質(zhì)是溶液中溶質(zhì)微粒對(duì)水的吸引。高滲溶液或低滲溶液會(huì)引起細(xì)胞發(fā)生褶皺、腫脹、破裂。在人工環(huán)境培養(yǎng)細(xì)胞理想的滲透壓為260～320mmol/L，一般來(lái)說(shuō)適合大多數(shù)細(xì)胞。

  4、氣體環(huán)境和PH值。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)部的PH值偏離正常范圍時(shí)，它會(huì)導(dǎo)致構(gòu)象酶發(fā)生變化，從而會(huì)影響細(xì)胞內(nèi)部的酶活性，嚴(yán)重影響細(xì)胞的代謝和生長(zhǎng)發(fā)育。大多數(shù)細(xì)胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4。在開(kāi)放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳?xì)怏w比例為宜。

  細(xì)胞培養(yǎng)步驟

  細(xì)胞培養(yǎng)步驟分為細(xì)胞復(fù)蘇、細(xì)胞傳代和細(xì)胞凍存

  復(fù)蘇

  復(fù)蘇是從低溫保存狀態(tài)中將細(xì)胞喚醒并重新引入正常生長(zhǎng)環(huán)境的過(guò)程。這通常涉及從液氮或-80℃冰箱中取出細(xì)胞凍存管，迅速將其放入37℃水浴中融化，然后轉(zhuǎn)移細(xì)胞至含有適當(dāng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中。復(fù)蘇過(guò)程中需要確保細(xì)胞快速而均勻地受熱，以減少冰晶對(duì)細(xì)胞的潛在傷害。復(fù)蘇后的細(xì)胞需要被放置在培養(yǎng)箱中，在適當(dāng)?shù)臏囟群蜐穸葪l件下培養(yǎng)，以便它們能夠重新適應(yīng)并恢復(fù)生長(zhǎng)。

  傳代

  傳代是當(dāng)細(xì)胞在培養(yǎng)中增殖到一定密度時(shí)，將其分離并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基中以繼續(xù)生長(zhǎng)的過(guò)程。這通常涉及使用胰蛋白酶或其他消化酶將細(xì)胞從培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶底部分離下來(lái)，然后將其重新懸浮在培養(yǎng)基中，并分配到新的培養(yǎng)容器中。傳代的目的是防止細(xì)胞因過(guò)度增殖而接觸抑制，從而保持細(xì)胞的活力和增殖能力。傳代過(guò)程中需要仔細(xì)操作，以避免對(duì)細(xì)胞造成過(guò)度機(jī)械應(yīng)力或污染。

  凍存

  凍存是將細(xì)胞保存于低溫環(huán)境中，以便長(zhǎng)期保存和后續(xù)使用的過(guò)程。這通常涉及使用含有細(xì)胞凍存液（如DMSO）的培養(yǎng)基，將細(xì)胞逐漸降溫至-80℃或更低，然后將其轉(zhuǎn)移到液氮中長(zhǎng)期保存。凍存過(guò)程中需要嚴(yán)格控制降溫速率，以減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而保護(hù)細(xì)胞的完整性和活性。凍存的細(xì)胞可以在需要時(shí)復(fù)蘇并重新引入培養(yǎng)，以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

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